杀孢产品的注册要求

杀孢子剂用于在坚硬、无孔的无生命表面和物体上杀灭孢子。细菌孢子被视为最难以消灭的微生物生命形式。

对于声称具备杀孢功效的抗菌产品，美国EPA要求在受控测试条件下生成功效数据。为了获得杀孢功效数据，应遵循AOAC的正规消毒剂杀孢能力测试方法966.04。为液态产品添加其具备在坚硬、无孔表面的杀孢功效声明，需要将60个接种了枯草芽孢杆菌（ATCC 19659）和生孢梭菌（ATCC 3584）孢子的不锈钢圆柱形载体暴露于杀孢子剂中。应对在该产品CSF上列出的三批A.I.拼箱产品进行测试。除此要求以外，在验证测试中，杀孢子剂还必须在60个载体（对于每批产品，每种生物体使用30个载体）上证明无孢子生长迹象（完全杀灭）。验证测试必须在单独的实验室内或由一组新的工作人员执行。

在欧洲，制造商根据EN13704方法执行悬浮测试，以证明产品具备杀孢能力。为证明具备杀孢能力，必须在接触时间少于或等于60分钟的情况下达到枯草芽孢杆菌（ATCC 6633）的>3对数去除率。

与在2002年发布的前一版本相比，2018年发布的最新EN13704版本有多项变化，包括孢子制备和测试生物体易感性检查方面的变化。

EN13704孢子制备需要80%的营养细胞以生成孢子，AOAC966.04则需要95%的营养细胞以生成孢子。制成孢子悬液之后，EN13704要求进行易感性测试，即使用戊二醛和过乙酸等两种标准杀菌剂来检查孢子悬液性能。对于每种杀菌剂，均分别采用高、低浓度进行测试。为达到EN13704合格标准，孢子悬液必须在低浓度时显示存活情况（<3对数去除率），在高浓度时显示杀灭情况（>3对数去除率）。AOAC 966.04要求进行耐盐酸测试，以对照2.5 M HCl标准检查孢子悬液性能。为达到AOAC 966.04合格标准，孢子必须具备2分钟或更长时间的2.5 M HCl耐受性。

在AOAC杀孢测试中使用孢子悬液，以及在EN13704中精心制备和使用孢子悬液，可确保声称具备杀孢能力的产品在功效测试中经受相称的考验。

季铵化合物杀孢功效

季铵盐化合物（QAC）是一种阳离子表面活性剂，具有广泛的抗微生物作用，不过该化合物在较低浓度下对于革兰氏阳性菌的抗菌效果通常高于革兰氏阴性菌。此类化合物对芽胞菌产生的效果显著降低³。

许多杀菌剂在低浓度情况下对非产孢细菌具有杀菌或抑菌作用，包括芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌的营养细胞。某些杀菌剂在高浓度情况下可能具备杀孢功效（例如戊二醛和CRA）。

相比之下，即使是高浓度的酒精、酚类物质、QAC和氯己定也不具备杀孢功效（虽然在高温下使用氯己定可能有杀灭孢子的效果）⁴。

QAC具有抑菌作用，可抑制孢子的生长（从萌发孢子中发育出营养细胞），但无法遏制实际的萌发过程（从休眠发展至代谢活跃状态）²。

QAC可能对芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌的营养细胞有一定的抑制作用，但无法消灭孢子本身。

杀孢声明要求针对孢子而不是营养细胞进行测试。为维持洁净室环境中的控制力度，应使用对孢子本身具有杀灭能力的生物杀菌剂。

[1] McDonnell, G, Russell AD. 抗菌剂和消毒剂：活性、作用和抗性。Clin Micrbiol. 1999年1月；12(1):147-179。
[2] Russell AD. 细菌孢子和化学杀孢子剂。Clin Microbiol Rev. 1990年4月；3(2):99-119。
[3] Sandle, T. CDC手册：洁净室清洁与消毒指南。1-27。
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. 氯己定对细菌孢子的作用。Int J Pharm. 1986;34:51-56。